Regeneração de plantas a partir de protoplastos de cultivares Brasileiros de citros

Resumo

O objetivo deste trabalho foi regenerar plantas a partir de protoplastos de cultivares brasileiras de citros, após isolamento, fusão e cultura. Protoplastos foram isolados a partir de células embriogênicas em suspensão e de mesófilo foliar de plântulas germinadas in vitro. A solução enzimática para o isolamento de protoplastos foi composta de manitol (0,7 M), CaCl₂ (24,5 mM), NaH₂PO₄ (0,92 mM), MES (6,15 mM), celulase (Onozuka RS - Yakult, 1%), macerase (Onozuka R10 - Yakult, 1%) e pectolyase Y-23 (Seishin, 0,2%). A cultura dos protoplastos em meio líquido após fusão química levou ao desenvolvimento de microcolônias e calos, posteriormente adaptados para meio semi-sólido. A embriogênese somática ocorreu espontaneamente, após dois subcultivos em meio de cultura MT suplementado com 500 mg/L de extrato de malte. Embriões bem desenvolvidos germinaram em meio MT modificado, com a adição de GA₃ (2,0 mM) e extrato de malte (500 mg/L). A regeneração de plantas também foi obtida por organogênese direta, com a formação de ápices caulinares a partir de embriões menores, em meio MT modificado com a adição de extrato de malte (500 mg/L), BAP (1,32 mM), NAA (1,07 mM) e água de coco (10 mL/L). As plântulas foram transferidas para meio de enraizamento e, posteriormente, para casa de vegetação, para fins de adaptação e desenvolvimento.